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讓我們一起來分析液相色譜柱使用注意事項

點擊次數(shù):1249 發(fā)布時間:2019-02-26
  液相色譜儀是進(jìn)行定量分析,雜質(zhì)檢查等分析工作中主要的儀器,色譜柱是液相色譜儀的核心部件。在這里,介紹一下液相色譜柱使用中的注意事項及使用心得。
  柱頭類型和不銹鋼毛細(xì)管接頭的匹配
  色譜柱是消耗品,不是儀器原配的情況多,如果接頭和柱頭深度匹配將會產(chǎn)生漏液或者死體積過大的現(xiàn)象。接頭比柱頭深度長,不易擰緊而漏液;接頭比柱頭深度短,柱頭內(nèi)留有空隙而產(chǎn)生死體積,使譜帶展寬和峰拖尾。
  溶劑的匹配轉(zhuǎn)換
  色譜柱內(nèi)保存溶劑和儀器系統(tǒng)內(nèi)存留溶劑,如果和流動相不匹配,使用前需進(jìn)行轉(zhuǎn)換。是流動村j含緩沖鹽時,如保存溶劑足純有機(jī)相或有機(jī)相比例,直接將柱接人使用,會導(dǎo)致緩沖鹽在柱內(nèi)結(jié)晶析出,造成柱頭堵塞。建議儀器和色譜柱經(jīng)常使用,用10%的有機(jī)溶劑保持即可。
  流動相及待測樣品的過濾
  日常分析工作中,我們使用的流動栩和待測樣品應(yīng)用0.45pm濾膜過濾后再連接或注入到色譜儀上。對于有機(jī)相比例的流動栩可以一起過濾出來備用,但是有機(jī)相比例小的流動相一定要現(xiàn)用現(xiàn)濾,分析結(jié)束時一定要用10%的有機(jī)溶劑沖洗管路及色譜柱,為有機(jī)相少的流動相容易滋生細(xì)菌,造成色譜柱堵寒,影響色譜柱性能。
  色譜柱分析時應(yīng)進(jìn)行平衡和老化
  進(jìn)行的方法是運(yùn)行幾次完整的分析程序(包括進(jìn)樣),直到觀察到峰形、保留時間和峰面積穩(wěn)定為止。對某些特定的待測物,如分子量大于1000的,閃擴(kuò)散速度慢,老化時間相應(yīng)要長,可采取大濃度進(jìn)樣或在同一個洗脫周期內(nèi)連續(xù)進(jìn)樣多針的方式加快老化。
  pH使用范圍
  一般認(rèn)為硅膠基質(zhì)柱子的pH使用范足2—8,如果選用的是品質(zhì)硅膠,加上密度鍵合和雙封尾,使pH耐受范同大提到lO。注射用頭孢拉定流動村1pH值為8,對色譜柱傷害,需要選擇pH值耐受性的色譜柱。
  峰形異常
  峰形對稱性的劣對峰面積和分離度有的影響,從而影響分析結(jié)果的性。檢查樣品足否過載,由于樣品過載引起的峰形后拖不能通過改變色譜條件消除。如果發(fā)現(xiàn)過載,需降低進(jìn)樣量(包括進(jìn)樣體積或濃度),進(jìn)樣量越小,峰形越好,例子如頭孢尼西鈉的測定。其次,硅醇基次級保留引起部分峰拖尾。這種情況發(fā)生,選擇密鍵合和*的雙蜂尾工藝的色譜柱能改善峰形。另外,溶解樣品的溶劑洗脫能力比流動相會發(fā)生峰前延,所以樣品好選用流動相溶解。
  色譜柱保存
  短期保存(隔夜或隔周末)用所用的流動相(不含緩沖鹽)保存為佳,以盡量減少下次使用的平衡時間。一般只建議在長期保存反相柱的時候用純醇或乙腈,使用80%左右有機(jī)相保存也屬好的選擇,且足以避免長菌。烈建議在柱身上貼標(biāo)簽標(biāo)明保存溶劑。離子交換柱和水性凝膠柱等適合保存在水溶液中的色譜柱,可加0.05%*溶液防止K菌。正相柱無論是短期還足長期,都推薦保存住所用流動相巾。

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